انزایمونه چې د مار په زهر کې د کاربوکسیل ایسټر بانډ باندې عمل کوي

د مار زهر انزایمونه لري چې د کاربوکسیل ایسټر بانډ هایدرولیس کوي.د هایدرولیسس سبسټریټونه فاسفولیپیډز، اسیتیلچولین او اروماتیک اسټیټ دي.دا انزایمونه په دریو ډولونو کې شامل دي: فاسفولیپیس، اسیتیلچولینسټریس او اروماتیک ایسټراس.د مار په زهرو کې ارګینین ایسټریس هم کولی شي مصنوعي ارګینین یا لیسین هایدرولیس کړي ، مګر دا په عمده ډول په طبیعت کې د پروټین پیپټایډ بانډ هایدرولیس کوي ، نو دا د پروټیز پورې اړه لري.هغه انزایمونه چې دلته بحث شوي یوازې د ایسټر سبسټریټ باندې عمل کوي او په هیڅ پیپټایډ بانډ باندې عمل نشي کولی.د دې انزایمونو په مینځ کې ، د اسیتیلچولینسټریس او فاسفولیپیس بیولوژیکي دندې خورا مهم دي او په بشپړ ډول مطالعه شوي.د مار ځینې زهرونه قوي اروماتیک ایسټریز فعالیت لري، کوم چې کولی شي د p-نایتروفینیل ایتیل ایسټر، a – یا P-naphthalene acetate او indole ethyl ester هایدرولیس کړي.دا لاهم معلومه نده چې ایا دا فعالیت د خپلواک انزایم لخوا تولید شوی یا د کاربوکسیلیسټریس پیژندل شوی اړخ اغیز ، یوازې د دې بیولوژیکي اهمیت پریږدئ.کله چې د Agkistrodon halys Japonicus زهر د p-nitrophenyl ethyl ester او indole ethyl ester سره تعامل شو، د p-nitrophenol او indole phenol هایدرولیسات ونه موندل شول؛برعکس، که دا ایسټرونه د کوبرا ژوشان فرعي ډولونو سانپ زهر او بنګارس ملټي سینکټس سانپ زهر سره عکس العمل وښيي ، نو دوی به ژر تر ژره هایډرولیز شي.دا معلومه ده چې دا کوبرا زهرونه قوي کولیینسټریز فعالیت لري، کوم چې ممکن د پورتنیو فرعي موادو د هایدرولیسس لپاره مسؤل وي.په حقیقت کې، Mclean et al.(1971) راپور ورکړ چې د کوبرا کورنۍ پورې اړوند د مارانو ډیری زهرونه کولی شي د انډول ایتیل ایسټر، نیفتالین ایتیل ایسټر او بټیل نافتالین ایسټر هایدرولیس کړي.د دې مارانو زهرونه له دې څخه راځي: کوبرا، تور غاړې کوبرا، تور شونډې کوبرا، طلایی کوبرا، مصری کوبرا، کینګ کوبرا، د سرو زرو کوبرا مامبا، تور مامبا او سپینې شونډې مامبا

د مار زهر کولی شي د میتیل انډول ایتیل ایسټر هایدرولیس کړي ، کوم چې په سیرم کې د کولینسټریس فعالیت ټاکلو لپاره سبسټریټ دی ، مګر دا د مار زهر د کولینسټریز فعالیت نه ښیې.دا په ډاګه کوي چې د کوبرا زهر کې یو نامعلوم ایسټریز شتون لري، کوم چې د کولینسټریس څخه توپیر لري.د دې انزایم د ماهیت د پوهیدو لپاره، نور جلا کولو کار ته اړتیا ده.

1، فاسفولیپیس A2

(I) نظر

فاسفولیپیس یو انزایم دی چې کولی شي ګلیسیریل فاسفیت هایدرولیس کړي.په طبیعت کې پنځه ډوله فاسفولیپیس شتون لري چې فاسفولیپیس A2 او فاسفولیپیس نومیږي.

A. , phospholipase B, phospholipase C او phospholipase D. د مار زهر په عمده توګه فاسفولیپیس A2 (PLA2) لري، د مارانو یو څو زهرونه فاسفولیپیس B لري، او نور فاسفولیپیس په عمده توګه د څارویو په نسجونو او باکتریا کې موندل کیږي.انځور 3-11-4 په سبسټریټ هایدرولیسس کې د دې فاسفولیپیسس د عمل ځای ښیي.

د فاسفولیپیسس په مینځ کې، PLA2 ډیر مطالعه شوی.دا ممکن د مار په زهرو کې ترټولو مطالعه شوي انزایم وي.د دې سبسټریټ د Sn-3-glycerophosphate په دوهم ځای کې د ایسټر بانډ دی.دا انزایم په پراخه کچه د مار په زهرو، د مچۍ زهر، د لړم په زهرو او د څارویو په نسجونو کې موندل کیږي، او PLA2 د مارانو په څلورو کورنیو کې په پراخه کچه شتون لري.ځکه چې دا انزایم د وینې سره حجرې ماتوي او د هیمولیسس لامل کیږي ، دا د "هیمولیسین" په نوم هم یادیږي.ځینې ​​​​خلک د PLA2 hemolytic lecithinase هم بولي.

لوډیک لومړی وموندله چې د مار زهر کولی شي د انزایمونو له لارې په لیسیټین باندې عمل کولو سره هیمولیتیک مرکب تولید کړي.وروسته، Delezenne et al.دا ثابته شوه چې کله د کوبرا زهر د آس په سیرم یا زرد باندې عمل کوي، دا یو هیمولیتیک ماده جوړوي.اوس دا معلومه شوه چې PLA2 کولی شي په مستقیم ډول د اریتروسایټ جھلی په فاسفولیپیدونو باندې عمل وکړي، د اریتروسیت جھلی جوړښت له منځه یوسي او د مستقیم هیمولیسس لامل شي؛دا کولی شي په سیرم یا اضافه شوي لیسیټین باندې هم عمل وکړي ترڅو د هیمولیتیک لیسیټین تولید کړي ، کوم چې د وینې سره حجرو باندې عمل کوي ترڅو غیر مستقیم هیمولیس تولید کړي.که څه هم PLA2 د مارانو د زهرو په څلورو کورنیو کې خورا زیات دی، د مختلف مارانو زهرو کې د انزایمونو مینځپانګه یو څه توپیر لري.راټلسنیک (سي

د مار زهر یوازې د PLA2 ضعیف فعالیت ښودلی.جدول 3-11-11 په چین کې د زهرجن مارانو 10 لوی زهرو د PLA2 فعالیت پرتله کوي.

جدول 3-11-11 په چین کې د 10 مارانو زهرو فاسفولیپیس VIII فعالیتونو پرتله کول

د مار زهر

د غوړ خوشې کول

الیفاټیک اسید

Cjumol/mg)

هیمولیتیک فعالیت CHU50/^ g * ml)

د مار زهر

غوړ اسیدونه خوشې کړئ

(^raol/mg)

هیمولیتیک فعالیت "(HU50/ftg * 1111)

نجاجه اتره

9. 62

یولس

مایکرسفال افیس

پنځه ټکی یو صفر

کاليسپالاس

8. 68

دوه زره او اته سوه

gracilis

V، acutus

7. 56

* * #

اوفیوفاګس هانا

درې ټکي اته دوه

یو سل او څلویښت

Bnugarus fasctatus

۷،۵۶

دوه سوه او اتيا

ب. ملټي سنکتس

یو ټکی نهه شپږ

دوه سوه او اتيا

وایپر او رسیلی

اوه اعشاریه صفر درې

T، mucrosquamatus

یو ټکی اته پنځه

سیمینسیس

T. stejnegeri

0. 97

(۲) جلا کول او پاکول

د مار په زهرو کې د PLA2 مینځپانګه لویه ده، او دا د تودوخې، تیزاب، الکلي او ډینټورنټ لپاره ثبات لري، نو د PLA2 پاکول او جلا کول اسانه دي.عام میتود دا دی چې لومړی په خام زهر کې د جیل فلټریشن ترسره کړئ ، بیا د آیون تبادلې کروماتګرافي ترسره کړئ ، او بل ګام تکرار کیدی شي.دا باید په پام کې ونیول شي چې د ایون تبادلې کروماتګرافي وروسته د PLA2 منجمد وچول باید د راټولیدو لامل نه شي، ځکه چې د منجمد وچولو پروسه اکثرا په سیسټم کې د ایونیک ځواک زیاتوي، چې د PLA2 د راټولولو یو مهم عامل دی.د پورته عمومي میتودونو سربیره، لاندې میتودونه هم اختیار شوي دي: ① Wells et al.② د PLA2 سبسټریټ انالوګ د لیګینډ په توګه د تړاو کروماتګرافي لپاره کارول شوی.دا لیګانډ کولی شي د Ca2+ سره د مار په زهر کې PLA2 سره وصل شي.EDTA اکثرا د eluent په توګه کارول کیږي.وروسته له دې چې Ca2+ لرې شي، د PLA2 او ligand ترمنځ تړاو کمیږي، او دا د لیګنډ څخه جلا کیدی شي.نور یې 30% عضوي محلول یا 6mol/L یوریا د الیونټ په توګه کاروي.③ هایدروفوبیک کروماتګرافي د PheiiylSephar0SeCL-4B سره ترسره شوې ترڅو په کارتیوټوکسین کې د PLA2 ټریس لرې کړي.④ انټي PLA2 انټي باډي په PLA2 کې د تړاو کروماتګرافي ترسره کولو لپاره د لیګنډ په توګه کارول شوي.

تر اوسه پورې، د مار د زهرو لوی شمیر PLAZ پاک شوي دي.Tu et al.(1977) لست شوی PLA2 د 1975 څخه دمخه د مار له زهر څخه پاک شوی. په وروستیو کلونو کې، هر کال د PLA2 جلا کولو او پاکولو په اړه لوی شمیر مقالې راپور شوي.دلته، موږ د چینایي پوهانو لخوا د PLA جلا کولو او پاکولو تمرکز کوو.

Chen Yuancong et al.(1981) په Zhejiang کې د Agkistrodon halys Pallas له زهرو څخه د PLA2 درې ډولونه جلا کړل، کوم چې د دوی د اسو الیکٹرک نقطو له مخې په تیزابي، غیر جانبدار او الکلین PLA2 ویشل کیدی شي.د دې زهرجنیت له مخې، غیر جانبدار PLA2 ډیر زهرجن دی، کوم چې د Presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin په توګه پیژندل شوی.الکلین PLA2 لږ زهرجن دی، او تیزابي PLA2 تقریبا هیڅ زهرجن نه لري.Wu Xiangfu et al.(1984) د دریو PLA2 ځانګړتیاوې پرتله کړې، پشمول د مالیکولر وزن، د امینو اسید ترکیب، N-ټرمینل، اسو الیکٹرک نقطه، حرارتي ثبات، د انزایم فعالیت، زهرجن او هیمولیتیک فعالیت.پایلو ښودلې چې دوی ورته مالیکولر وزن او حرارتي ثبات درلود ، مګر په نورو اړخونو کې د پام وړ توپیرونه درلودل.د انزایم فعالیت اړخ کې، د اسید انزایم فعالیت د الکلین انزایم فعالیت څخه لوړ و.د موږک سره د وینې حجرو باندې د الکلین انزایم هیمولیتیک تاثیر خورا قوي و ، وروسته غیر جانبدار انزایم ، او اسید انزایم په سختۍ سره هیمولیز شوی.نو ځکه، دا اټکل کیږي چې د PLAZ هیمولیتیک اغیز د PLA2 مالیکول چارج پورې تړاو لري.Zhang Jingkang et al.(1981) د Agkistrodotoxin کریستالونه جوړ کړل.Tu Guangliang et al.(1983) راپور ورکړ چې یو زهرجن PLA د 7. 6 isoelectric point سره جلا شوی او د فوجیان څخه د Vipera rotundus زهر څخه جلا شوی او پاک شوی ، او د هغې فزیکي او کیمیاوي ملکیتونه ، د امینو اسید ترکیب او په N کې د 22 امینو اسید پاتې شونو ترتیب. - ترمینل ټاکل شوی.Li Yuesheng et al.(1985) په Fujian کې د Viper rotundus زهر څخه بل PLA2 جلا او پاک کړ.د PLA2 فرعي واحد 13 800 دی، د isoelectric point 10.4 دی، او ځانګړی فعالیت یې 35/xnioI/miri mg دی. د سبسټریټ په توګه د لیسیټین سره، د انزایم غوره pH 8.0 دی او غوره تودوخه 65 ° C ده. LD5 په موږکانو کې د رګونو له لارې داخلیږي.دا 0.5 ± 0.12mg/kg دی.دا انزایم واضح انټي کوګولینټ او هیمولیتیک اغیزې لري.زهرجن PLA2 مالیکول د 18 ډوله امینو اسیدونو 123 پاتې شونو څخه جوړ دی.مالیکول په سیستین (14)، اسپارټیک اسید (14) او ګلیسین (12) کې بډای دی، مګر یوازې یو میتیونین لري، او د هغې N-ټرمینل د سیرین پاتې شونو دی.د توګوانګ لخوا جلا شوي PLA2 سره پرتله کول، مالیکولر وزن او د دوه ایزو انزایمونو د امینو اسید پاتې شونو شمیر خورا ورته دی او د امینو اسید ترکیب هم خورا ورته دی ، مګر د اسپارټیک اسید او پرولین پاتې شونو شمیر یو څه توپیر لري.د ګوانګسي کینګ کوبرا سانپ زهر بډایه PLA2 لري.Shu Yuyan et al.(1989) یو PLA2 له زهر څخه جلا کړ، کوم چې د اصلي زهر څخه 3.6 ځله لوړ ځانګړی فعالیت لري، د 13000 مالیکول وزن، د 122 امینو اسید پاتې شونو جوړښت، د 8.9 د اسو الیکٹرک نقطه، او ښه حرارتي ثبات لري.د وینې په سرو حجرو باندې د لومړني PLA2 اغیزې د الکترون مایکروسکوپ مشاهدې څخه ، دا لیدل کیدی شي چې دا د انسان د سره وینې حجرو غشا باندې څرګند اغیزه لري ، مګر د وزې سره د وینې حجرو باندې هیڅ څرګند اغیزه نلري.دا PLA2 په انسانانو، وزو، خرگوش او ګني خنزیر کې د وینې سره د سرو حجرو په الکتروفوریتیک سرعت کې ښکاره ځنډ اغیزه لري.Chen et al.دا انزایم کولی شي د ADP، کولیګین او سوډیم arachidonic اسید لخوا هڅول شوي پلیټلیټ راټولولو مخه ونیسي.کله چې د PLA2 غلظت 10/xg/ml~lOOjug/ml وي، د پلیټلیټ راټولول په بشپړ ډول منع کیږي.که وینځل شوي پلیټینټونه د موادو په توګه وکارول شي، PLA2 نشي کولی د 20Mg/ml په غلظت کې د راټولیدو مخه ونیسي.اسپرین د cyclooxygenase مخنیوی کونکی دی، کوم چې کولی شي په پلیټلیټ باندې د PLA2 اغیز منع کړي.PLA2 کیدای شي د arachidonic اسید د هایدروولیز کولو په واسطه د پلیټلیټ راټولولو مخه ونیسي ترڅو د ترومبوکسین A2 ترکیب کړي.د ژیجیانګ په ولایت کې د Agkistrodon halys Pallas زهر لخوا تولید شوي د PLA2 حل ترکیب د سرکلر ډیکرویزم ، فلوروسینس او ​​UV جذب له لارې مطالعه شوی.تجربوي پایلو ښودلې چې د دې انزایم اصلي سلسله جوړښت د نورو ډولونو او نسلونو ورته انزایمونو سره ورته و ، د کنکال جوړښت د تودوخې ښه مقاومت درلود ، او په تیزاب چاپیریال کې جوړښتي بدلون د بیرته راګرځیدو وړ و.د فعاله کونکي Ca2+ او انزایم ترکیب د ټریپټوفان د پاتې شونو چاپیریال اغیزه نه کوي، پداسې حال کې چې مخنیوی کونکي Zn2+ برعکس کوي.هغه طریقه چې د محلول pH ارزښت د انزایم فعالیت اغیزه کوي د پورتنیو ریجنټونو څخه توپیر لري.

د مار د زهرو د PLA2 د پاکولو په پروسه کې، یوه څرګنده پدیده دا ده چې د مار زهر دوه یا ډیر PLA2 elution چوټي لري.دا پدیده په لاندې ډول تشریح کیدی شي: ① د isozymes د شتون له امله؛② یو ډول PLA2 د مختلفو مالیکولر وزنونو سره په مختلفو PLA2 مرکبونو کې پولیمر شوی دی، چې ډیری یې د 9 000 ~ 40 000 په حد کې دي؛③ د PLA2 او د مار د زهرو نورو اجزاوو ترکیب PLA2 پیچلی کوي؛④ ځکه چې په PLA2 کې د امایډ بانډ هایډرولیز شوی، چارج بدلیږي.① او ② عام دي، یوازې د یو څو استثناوو سره، لکه PLA2 په CrWa/w سانپ زهر کې

دوه حالتونه دي: ① او ②.دریم حالت په PLA2 کې د لاندې مارانو په زهرو کې موندل شوی: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, Palestinian viper, sand viper, and terrible rattlesnake km.

د قضیې ④ پایله د PLA2 د مهاجرت سرعت د الیکٹروفورسیس په جریان کې بدلوي، مګر د امینو اسید ترکیب نه بدلیږي.پیپټایډونه د هایدرولیسس په واسطه مات کیدی شي، مګر عموما دوی لاهم د ډیسلفایډ بانډونو سره تړلي دي.د ختیځ کندې ریټلسنیک زهر د PLA2 دوه ډولونه لري چې په ترتیب سره د ټایپ a او ډول p PLA2 نومیږي.د دې دوه ډوله PLA2 ترمنځ توپیر یوازې یو امینو اسید دی، دا دی چې په یو PLA2 مالیکول کې ګلوټامین په بل PLA2 مالیکول کې د ګلوټامیک اسید لخوا ځای په ځای کیږي.که څه هم د دې توپیر دقیق دلیل روښانه ندی، په عمومي توګه داسې انګیرل کیږي چې دا د PLA2 له مینځه وړلو سره تړاو لري.که چیرې په فلسطیني وایپر زهر کې PLA2 د خام زهر سره تودوخه وساتل شي ، د دې انزایم مالیکولونو کې پای ګروپونه به د پخوا په پرتله ډیر شي.له C PLA2 څخه جلا شوی د مار له زهر څخه دوه مختلف N-ټرمینل لري او مالیکولر وزن یې 30000 دی. دا پدیده کیدای شي د PLA2 د غیر متناسب ډیمر له امله رامینځته شي، کوم چې د PLA2 لخوا د ختیځ ډیمنډ بیک راټلسینیک په زهر کې د سمیټریک ډیمر سره ورته دی. او ویسټرن ڈائمنډ بیک ریټلسنیک.د آسیا کوبرا د ډیری فرعي ډولونو څخه جوړه شوې ده، چې ځینې یې په طبقه بندي کې خورا مشخص ندي.د مثال په توګه، هغه څه چې د کوبرا اوټر کاسپین فرعي ډولونو په نوم یادیدل اوس پیژندل شوي

دا باید د بهرنی کسپین سمندر کوبرا ته منسوب شي.څرنګه چې ډیری فرعي ډولونه شتون لري او دوی یوځای سره مخلوط شوي، د مار د زهر جوړښت د مختلفو سرچینو له امله خورا توپیر لري، او د PLA2 isozymes منځپانګه هم لوړه ده.د مثال په توګه، د کوبرا زهر

لږترلږه 9 ډوله PLA2 isozymes د r^ll ډولونو کې موندل شوي، او 7 ډوله PLA2 isozymes د کوبرا فرعي ډوله کیسپین په زهرو کې موندل شوي.Durkin et al.(1981) د PLA2 مینځپانګه او د مار په مختلف زهرو کې د ایزوزیمونو شمیر مطالعه کړ ، پشمول د 18 کوبرا زهرونه ، 3 د مابا زهرونه ، 5 د وایپر زهرونه ، 16 د ریټل سانپ زهرونه او 3 د سمندري سانپ زهرونه.په عموم کې، د کوبرا زهر د PLA2 فعالیت لوړ دی، د ډیری isozymes سره.د وایپر زهر د PLA2 فعالیت او isozymes منځني دي.د مامبا زهر او ریټلسنیک زهر د PLA2 فعالیت خورا ټیټ دی یا د PLA2 فعالیت نلري.د سمندري مار زهر PLA2 فعالیت هم ټیټ دی.

په وروستیو کلونو کې داسې راپور نه دی ورکړل شوی چې د مار په زهرو کې PLA2 د فعال ډیمر په بڼه شتون لري، لکه د ختیځ رومبوفورا ریټلسنیک (C. د سانپ زهر ډول A او PLA2 ډول لري، چې دواړه د دوه ورته فرعي واحدونو څخه جوړ شوي دي. ، او یوازې dimerase لري

فعالیت.Shen et al.همدارنګه وړاندیز وکړ چې یوازې د مار د زهر PLA2 ډیمر د انزایم فعاله بڼه ده.د ځایي جوړښت مطالعه دا هم ثابتوي چې د لویدیځ ډیمنډ بیک ریټلسنیک PLA2 د ډیمر په شکل کې شتون لري.د مچیو ترکیب

د مار د زهرو دوه مختلف PLA ^ Ei او E2 شتون لري، په کوم کې 仏 د ډیمر په بڼه شتون لري، ډیمر فعال دی، او جلا شوی مونومر غیر فعال دی.Lu Yinghua et al.(1980) د E. Jayanthi et al نور فزیکي او کیمیاوي ملکیتونه او د عکس العمل حرکتونه مطالعه کړل.(1989) د وایپر زهر څخه یو بنسټیز PLA2 (VRVPL-V) جلا کړ.د مونومر PLA2 مالیکولر وزن 10000 دی، کوم چې وژونکي، انټي کوګولینټ او اذیما اغیزې لري.انزایم کولی شي د PH 4.8 په حالت کې د مختلف مالیکولر وزنونو سره پولیمرونه پولیمرائز کړي، او د پولیمر کولو درجې او د پولیمر مالیکولر وزن د تودوخې په زیاتوالي سره لوړیږي.د پولیمر مالیکولر وزن چې په 96 ° C کې رامینځته کیږي 53 100 دی ، او د دې پولیمر PLA2 فعالیت دوه لخوا ډیریږي.